產品簡稱:MOVAS-1
中文名稱:小鼠主動脈平滑肌細胞
細胞數量:1*10^6
組織來源:成年C57BL/6小鼠,心,主動脈,平滑肌
形態特征:紡錘形
生長方式:貼壁生長
背景描述:1999年12月用膠原酶-彈性蛋白酶消化法分離的原代血管平滑肌細胞,用SV40大T抗原和新霉素耐藥基因的逆轉錄病毒進行了轉染。在0.4mg/mlG418存在下選擇克隆并通過限制稀釋進行亞克隆。
培養條件:DMEM高糖,10%胎牛血清,丙酮酸鈉;空氣95%,二氧化碳5%;37℃培養
換液頻:率2-3天
傳代比例:1:5-1:8
凍存液配方:95%完全培養基,5%DMSO
安全性:BSL-1
供應限制:僅供科研
運輸方式:常溫運輸(T25培養瓶)
細胞培養方法:
1、小鼠主動脈平滑肌細胞規格細胞傳代:細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%胰酶(T25瓶),使胰酶覆蓋整個瓶或皿,蓋好放入培養箱消化;
③1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入完全培養基終止消化;若細胞還是貼壁,放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止;
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;
⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中,T25培養瓶加6-8ml培養基;
⑥懸浮細胞直接離心收集,細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。
2、細胞復蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時間1min左右,加入4-5ml培養基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養基吹勻,將細胞懸液加入培養瓶中,補加適量培養基。
3、細胞凍存:待細胞生長狀態良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%胰蛋白酶(T25瓶)
②1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入完全培養基終止消化;
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細胞;
④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。