實驗原理:細胞在發生凋亡時,會激活一些DNA內切酶,這些內切酶會切斷核小體間的基因組DNA,可產生180-200bp的DNA片段。基因組DNA斷裂時,暴露的 3’-OH可以在末端脫氧核苷酸轉移酶(Terminal Deoxy nucleotidyl Transferase,TdT)的催化下,加上熒光素(FITC)標記的dUTP,從而可以通過熒 光顯微鏡或流式細胞儀進行凋亡的檢測。在此基礎上接辣根過氧化物酶標記的熒光素抗體,可進一步放大檢測信號,可在普通顯微鏡下觀察實驗結果。由于正常的或正在增殖的細胞幾乎沒有DNA斷裂,因而沒有3’-OH形成,很少能夠被染色。
分類:Tunel染色分為普通法和熒光法兩種。
用途:可用于石蠟包埋組織切片、冰凍組織切片、培養的細胞凋亡測定,靈敏度比一般的組織化學和生物化學高。
樣本要求:
1、石蠟切片:取下適當的新鮮的組織塊固定于4%-10%濃度的多聚甲醛或中性甲醛中,甲醛與組織塊體積比在10:1和20:1之間,4度保存運輸。
2、冰凍切片:取下的新鮮組織應立即放入超低溫冰箱或者液氮中,用干冰運輸,固定好的切片應于-80或者-20度保存,并盡快用于檢測。
3、細胞爬片:細胞爬片4%多聚甲醛固定30分鐘,換PBS緩沖液4度保存運輸,并盡快用于檢測。
提供的服務:包含試劑盒,切片,染色,拍照,每個樣本提供一張照片包含凋亡率。